一、RSV動(dòng)物模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

1. 常用動(dòng)物及特點(diǎn)

2. 選擇依據(jù)

• 研究目的：

• 免疫機(jī)制 → BALB/c小鼠（Th2偏向）

• 藥物/疫苗評(píng)價(jià) → 棉鼠（病變明顯）

• 傳播研究 → 雪貂

• 病毒株適應(yīng)性：人RSV（如A2株）在小鼠中需高劑量感染，而牛RSV（BRSV）在牛模型中更易致病。

二、RSV動(dòng)物模型構(gòu)建病毒株準(zhǔn)備

1. 常用RSV毒株

• 人RSV-A（如A2、Long株）

• 人RSV-B（如B1、18537株）

• 牛RSV（BRSV）（用于牛或棉鼠模型）

2. 病毒擴(kuò)增與滴定

• 細(xì)胞培養(yǎng)：

• 使用 HEp-2 或 Vero 細(xì)胞擴(kuò)增RSV；

• 37℃培養(yǎng)，觀察CPE（細(xì)胞病變效應(yīng)）。

• 病毒純化：超速離心去除細(xì)胞碎片。

• 病毒滴度測(cè)定：

• 噬斑試驗(yàn)（Plaque Assay, PFU/mL）

• TCID??（組織培養(yǎng)感染劑量）

三、感染途徑與劑量

1. 感染方式

2. 感染劑量

• 小鼠：10?–10? PFU（BALB/c需較高劑量）

• 棉鼠：10?–10? PFU

• 雪貂：10? PFU

四、模型評(píng)估指標(biāo)

1. 臨床癥狀

• 體重下降（>15%需考慮安樂si）

• 呼吸頻率增加、弓背、豎毛

• 雪貂：咳嗽、鼻分泌物增多

2. 病毒學(xué)檢測(cè)

• 肺組織病毒載量（qPCR檢測(cè)RSV-N或-F基因）

• 鼻洗液/支氣管肺泡灌洗液（BALF）病毒滴度（噬斑試驗(yàn)）

3. 病理學(xué)分析

• 肺組織HE染色：

• 炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)（中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）

• 肺泡壁增厚、支氣管上皮損傷

• 免疫組化：檢測(cè)RSV抗原分布

4. 免疫應(yīng)答分析

• 體液免疫：ELISA檢測(cè)RSV特異性IgG/IgA

• 細(xì)胞免疫：

• 流式檢測(cè)CD4?/CD8? T細(xì)胞

• 細(xì)胞因子（IFN-γ、IL-4、IL-13）

五、注意事項(xiàng)

1. 生物安全

• RSV需在 BSL-2 實(shí)驗(yàn)室操作。

• 雪貂模型需防止交叉感染（RSV可通過接觸/氣溶膠傳播）。

2. 動(dòng)物福利

• 設(shè)置 人道終點(diǎn)（如體重下降>20%、嚴(yán)重呼吸困難）。

• 麻醉優(yōu)化（異fu烷優(yōu)于yi醚，減少刺激）。

3. 對(duì)照設(shè)置

• 陰性對(duì)照：PBS或未感染組

• 陽性對(duì)照：已知致病株（如RSV-A2）

六、常見問題與優(yōu)化

1. 小鼠模型病變較輕

• 解決方案：

• 使用 BALB/c 而非C57BL/6（更敏感）

• 提高感染劑量（10? PFU）

• 聯(lián)合 poly(I:C) 或 LPS 增強(qiáng)炎癥

2. 免疫病理增強(qiáng)（疫苗增強(qiáng)性疾病）

• 現(xiàn)象：某些RSV疫苗（如FI-RSV）可導(dǎo)致Th2型免疫病理。

• 檢測(cè)指標(biāo)：

• 肺嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)

• IL-5、IL-13水平升高

3. 傳播模型構(gòu)建困難

• 雪貂共飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：感染與未感染動(dòng)物混合飼養(yǎng)，監(jiān)測(cè)接觸傳播。